“scRNA-seq”到底有多少方法？

1、單細胞轉(zhuǎn)錄組建庫方法分類目前單細胞轉(zhuǎn)錄組的建庫方法基本可以按照技術(shù)方案分為兩類：1）一類依賴于孔板通俗的說，就是將已經(jīng)解離的單個細胞分配到孔板中各自的孔中，在孔中單個細胞完成裂解、RNA富集、加細胞條碼(cellbarcode)和單分子識別碼(UMI)等步驟后再收集到一起進行測序。而具體的實施方案會根據(jù)每種建庫方案有一些特色型的變動。目前這一類方法包括CEL-seq、CEL-seq2、SMART-seq、SMART-seq2、Microwell-seq等。特點:a.基于孔...

什么是熒光定量PCR?

實時熒光定量PCR（Real-timeqPCR）是指在PCR反應中加入熒光基團，通過連續(xù)監(jiān)測熒光信號出現(xiàn)的先后順序以及信號強弱的變化，即時分析目的基因的初始量的一種PCR技術(shù)。一、熒光化學物質(zhì)Real-timeqPCR所使用熒光化學物質(zhì)有熒光染料和熒光探針兩類。1、熒光染料目前主要使用的熒光染料是SYBRGreenI，SYBRGreenI是一種嵌入型花箐染料，在488nm（藍光）照射激發(fā)后，在522nm（綠光）具有發(fā)射高峰。SYBRGreenI是嵌在DNA螺旋的小溝里面的，一...

教你用熒光定量PCR儀？（ABI 7500）

打開電腦及儀器電源，雙擊電腦桌面上的7500software圖標打開程序。圖片來源：網(wǎng)絡軟件主界面：圖片來源：7500/7500FastReal-TimePCRSystemGETTINGSTARTEDGUIDE實驗設置：a.實驗名稱b.儀器型號c.實驗目的：定量、Genotyping(基因分型)、定性（有/無）d.定量類型：標準曲線、相對標準曲線、相對定量e.實驗方法：探針法、染料法f.模板類型：gDNA、cDNAg.Target設置：Target包括目的基因、內(nèi)參基因（多少...

PCR技術(shù)之父-凱利·穆利斯

部分友友還是搞不清楚PCR是個什么東西，搞不清楚為什么可以進行基因擴增，這一節(jié)我們就了解一下穆利斯與PCR技術(shù)的發(fā)現(xiàn)與發(fā)展。一、PCR的提出和發(fā)展1983年春天的一個周五晚上，穆利斯開車帶著女友前往鄉(xiāng)間度周末。在蜿蜒的鄉(xiāng)間公路上開著車，一段DNA反復復制的景像，在他的腦海里冒了出來。事實上，DNA復制起始于DNA的解鏈，只需要通過加熱讓雙鏈DNA變?yōu)閱捂淒NA，然后再添加和單鏈DNA末端相結(jié)合的引物DNA，這樣就開始了復制的過程，因此，只需要人為的給予其一些條件，就可以讓DN...

NanoDrop One/OneC的UV-Vis模塊檢測

UV-Vis檢測檢測原理UV-Vis應用檢測的波長范圍從190nm到850nm，可以檢測多達40個波長的吸收光，吸光度顯示在屏幕上，并納入檢測報告。此模塊功能可用于檢測未知樣品，確定最佳吸收波長，或者檢測擁有多個吸收峰的樣品。操作流程1、在“主頁”屏幕上，選擇用戶自定義選項卡，然后點擊UV-Vis；2、選定最多40個待監(jiān)測波長（或者您也可以在檢測完成后，再選定波長），以及是否使用自動化光程調(diào)整、分析波長和基線矯正；3、吸取2μL空白對照溶液滴加到基座上，降下檢測臂（或?qū)⒓尤肟?..

POCT質(zhì)譜的希望之旅

POCT質(zhì)譜的希望之旅自POCT概念出現(xiàn)之后，其給予了所有分散式檢驗需求的用戶于充分的滿足，成為繼生化、免疫、分子診斷之后的第四個IVD賽道，并正在高速沖擊未來的IVD市場總量。POCT使得檢測工作從實驗室擴散到任何有需求的實地場景，這也使得靈敏度、準確度等一些指標被弱化，但在新冠和呼吸道疾病“盛行”中的防治過程中，其作用貢獻已遠超指標弱化帶來的問題。不僅如此，這些年分子POCT、質(zhì)譜POCT及其他技術(shù)融合POCT產(chǎn)品井噴式出現(xiàn)，使得POCT的潛力進一步被發(fā)現(xiàn)，如果解決了大部...

PCR程序設置和什么有關(guān)？影響大么？

PCR程序設置和什么有關(guān)？影響大么？一旦確定了合適的DNA起始量和PCR組分，就必須設定PCR循環(huán)和運行參數(shù)，從而確保高效擴增。DNA聚合酶的特點、PCR緩沖液的類型、模板DNA的復雜程度都會影響反應條件的設置。1、起始高溫變性步驟在PCR起始階段，通常是在94–98℃下孵育1-3min將雙鏈DNA模板解離成單鏈，從而使引物可與目標區(qū)域結(jié)合并開始延伸。此步的高溫條件使起始DNA變性，確保在第一個擴增循環(huán)期間實現(xiàn)有效的目標序列擴增，此外也有助于使樣品中可能存在的熱不穩(wěn)定性蛋白酶...

教你使用NanoDrop One

一、基本儀器操作1、NanoDropOne主頁屏幕2、NanoDropOne檢測屏幕3、NanoDropOne常規(guī)操作二、檢測核酸（雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA）開始使用NanoDropOne儀器進行基座檢測之前，抬起儀器檢測臂然后清潔上下基座。至少需使用新的實驗室無塵紙擦拭基座。1.在“主頁”屏幕上，選擇核酸選項卡并點擊雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA，根據(jù)要檢測的樣品而定。2.將1-2μL空白檢測溶液移取到下基座，然后降下檢測臂。3.點擊空白檢測并等待檢測完成。如果自動空...